质谱定量蛋白质组学-iTRAQ
概述
蛋白质组学(Proteomics)表示“一种基因组所表达的全套蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。蛋白质组学是一门以全面的蛋白质性质研究为基础,在蛋白质水平对疾病机理、细胞模式、功能联系等方面进行探索的科学。
技术特点
■ 可同时标记2~8个样本 ■ 标记完全,标记效率高达 97%以上 ■ 较高的重复性,能简化谱的复杂程度、提高离子强度 ■ iTRAQ技术不仅可发现胞浆蛋白,还有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技术可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白 ■ 可标记修饰后的氨基酸,因此对磷酸化蛋白等翻译后修饰蛋白进行定性定量研究 ■ 报告离子的相对分子质量较低(113~121),低分子量区是质谱定性(质量确定)和定量(丰度比较)较为准确的区域,因此质谱检测更为灵敏可靠
技术流程
■ 样本经过不同处理后提取蛋白质 ■ 蛋白质经过还原,封闭后胰蛋白酶酶切 ■ 肽段混合物分别用不同的iTRAQ试剂标记 ■ 等量混合各种iTRAQ试剂标记的肽段 ■ MS/MS质谱检测及分析
技术应用
■ 同时标记 8 个样品,一次实验实现多达 8 个样品的蛋白质鉴定和定量 ■ 可以进行多个时间点蛋白质组动态变化的监测 ■ 可以分析详细分期/型的临床疾病样本,并可设计样本重复 ■ 细胞周期、细胞信号传导整个过程的蛋白质组动态学研究
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